【实践能力】护考实践能力之酶活性测定方法

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　　酶活性测定方法

　　1.按反应时间分类法：

　　20世纪50年代以前大都使用固定时间法。这种方法是以酶催化反应的平均速度来计算酶的活性，现多已不用。50年代中期开始采用连续监测法。这种方法用自动生化分析仪上完成，可以测酶反应的初速度，其结果远比固定时间法准确，在高浓度标本尤为明显，但本法也受到反应时间，反应温度，试剂等的影响，应加以注意。

　　(1)定时法：(两点法)

　　通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。

　　酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间，通过加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等，使反应完全停止(也叫中止反应法)。加入试剂进入化学反应呈色测出底物和产物的变化。

　　该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。

　　优点：简单易行，对试剂要求不高。

　　缺点：难保证测定结果的真实性。

　　难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。随着保温时间的延续，酶变性失活加速。

　　(2)连续监测法：又称为动力学法或速率法、连续反应法。

　　在酶反应过程中，用仪器监测某一反应产物或底物浓度随时间的变化所发生的改变，通过计算求出酶反应初速度。

　　连续监测法根据连续测得的数据，可选择线性期的底物或产物变化速率用于计算酶活力。

　　因此连续监测法测定酶活性比定时法更准确。

　　实际工作中，采用工具酶的酶耦联法已经成为应用最广、最频繁测酶活性浓度的方法。

　　(3)平衡法：通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法，又叫终点法。

　　2.按检测方法分类法：

　　①分光光度法;②旋光法;③荧光法;④电化学方法;⑤化学反应法;⑥核素测定法;⑦量热法。

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（编辑：广东华图）